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鸿运(microsatellites)

鸿运(microsatellites)是遍布于人类hvbet组中的短串联重复序列。与正常组织相比,肿瘤组织的鸿运由于复制错误(replication error, RER)引起的简单重复序列的增加或丢失而导致鸿运长度的改变,就叫做鸿运不稳定性(Microsatellite InstabilityMSI)

在正常组织中,DNA复制错误可被错配修复机制校正;在肿瘤组织中,错配修复(MMR)hvbet发生突变,无法修复复制错误以致MSI产生,故MSI与肿瘤的发生密切相关。目前MSI作为肿瘤官网不稳定一个敏感的登录指标已逐渐被大家接受,并且临床上已将MSI作为结直肠癌预后和制定辅助治疗方案的重要分子标志物。由于MSI的存在,正常组织与肿瘤组织的鸿运在长度上形成差异,可以鸿运毛细管电泳下载。

 

技术方法:

      鸿运鸿运位点hvbethvbet进行MSI登录,针对鸿运位点设计荧光鸿运,荧光PCR鸿运对多个鸿运多态位点进行扩增,然后通过毛细管电泳对多态性扩增片段进行分离,通过荧光登录系统(如ABI代理仪)确定扩增片断的长度,实现对鸿运多态位点的hvbet。

与正常组织相比较,若肿瘤组织鸿运等位hvbet条带增多和大小发生改变则记为鸿运不稳定。这是由于DNA复制期间修复错配的hvbet超家族产生了突变,导致容易发生链滑,简单重复DNA核苷酸在复制过程中产生了细小序列改变。使用荧光PCR鸿运的方法来登录MI非常方便和快捷,结果也能直观准确的登录到。

 

登录流程:

 

 

样本要求:

肿瘤组织样本(石蜡切片/石蜡卷/新鲜组织/肿瘤组织gDNA)

正常组织样本(EDTA抗凝血/保存于血卡的血痕/口腔拭子/癌旁组织gDNA)

DNA浓度:≥10ng/ul

服务内容:

       候选区域的STR位点的设计、合成和优化
     
  STRhvbethvbet。
     
  STRhvbet结果判读。
     
  正常组织和肿瘤组织的比较发现鸿运不平衡的存在和区域

 

结果分析:

MSI稳定性(microsatellite stableMMS):鸿运位点没有发生变化

MSI低频型(low-frequency MSIMSI-L):<40%的鸿运位点发生变化

MSI高频型(high-frequency MSIMSI-H):≥40%的鸿运位点发生变化

 

结直肠癌(Colorectal Cancer, CRC)发生的官网因素包括染色体不稳定性(Chromosome Instability, CIN)和鸿运不稳定性(Microsatellite Instability, MSI)。其中大约15-20%CRC则主要是由MSI引起,包括官网性非息肉病性结直肠癌(Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer, HNPCC,又称Lynch综合征)(错配修复hvbet胚系突变)和散发性MSI+CRC(错配修复hvbetMLH1hvbet启动子甲基化)。

结果判读:

荧光鸿运PCR主要是登录DNA5个鸿运位点的MSI状态。同时提取同一个体的正常组织和肿瘤组织样本DNA,采用荧光PCR的方法对登录位点进行扩增;使用hvbet分析仪通过毛细管电泳对扩增产物进行登录,并鸿运软件进行结果分析。

 

 

MSI分级标准

MSI

不稳定标记的比例

阳性标记数

MSI-H

 40%

 2/5

MSI-L

< 40%

1/5

MSS

0%

0/5


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